El glifosato es efectivo para matar una amplia variedad de plantas, incluyendo hierbas y plantas de hoja ancha y leñosas. por volumen, es uno de los herbicidas más ampliamente utilizados. En 2007, el glifosato fue el herbicida más usado en el sector agrícola de los Estados Unidos, aplicando de 180 a 185 millones de libras (82,000 a 84,000 toneladas), el segundo más utilizado en el hogar y jardín con 5 a 8 millones de libras (2,300 a 3,600 toneladas) y el gobierno aplicó de 13 a 15 millones de libras (5,900 a 6,800 toneladas) en la industria y el comercio. Se usa comúnmente para agricultura, horticultura, viticultura y silvicultura, así como mantenimiento de jardín (incluido el uso doméstico). tiene un efecto relativamente pequeño en algunas especies de trébol y gloria de la mañana.

El glifosato y los herbicidas relacionados con frecuencia se usan en la erradicación de especies invasoras y la restauración del hábitat, especialmente para mejorar el establecimiento de plantas nativas en los ecosistemas de las praderas. la aplicación controlada generalmente se combina con un herbicida selectivo y métodos tradicionales de erradicación de malezas, como el mulching, para lograr un efecto óptimo.

en muchas ciudades, el glifosato se rocía a lo largo de las aceras y las calles, así como en las grietas entre el pavimento donde a menudo crecen las malezas. sin embargo, hasta un 24% de glifosato aplicado a superficies duras puede ser escurrido por agua. La contaminación por glifosato del agua superficial se atribuye al uso urbano y agrícola. El glifosato se usa para limpiar las vías del ferrocarril y eliminar la vegetación acuática no deseada. desde 1994, el glifosato se ha utilizado en fumigaciones aéreas en Colombia en programas de erradicación de coca; Colombia anunció en mayo de 2015 que para octubre dejaría de usar glifosato en estos programas debido a preocupaciones sobre la toxicidad humana del químico.Además de su uso como herbicida, el glifosato también se usa para la desecación del cultivo (siccation) para aumentar el rendimiento de la cosecha y, como resultado de la desecación, para aumentar la concentración de sacarosa en la caña de azúcar antes de la cosecha. la aplicación de glifosato justo antes de la cosecha en granos (como trigo, cebada y avena) mata el cultivo de alimentos para que se seque de manera más rápida y uniforme, similar al uso de desecantes. Este cultivo seco no tiene que ser hilerado secado) antes de la cosecha, pero puede ser cortado y cosechado fácilmente. esto le ahorra al agricultor tiempo y dinero, lo cual es importante en las regiones del norte donde la temporada de crecimiento es corta. Los excesivos niveles de residuos en los frijoles resultantes de una aplicación incorrecta pueden hacer que la cosecha no sea apta para la venta.

en 2003 monsanto patentó el uso de glifosato como antiparasitario, y en 2017 comercializaron una formulación de resumen sin glifosato, como herbicida para el césped.